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李斯特氏菌屬(Listeria)為一種短小的革蘭氏陽性無芽孢桿菌，DNA堿基組成G+C含量為36-38mol%，廣泛存在于環(huán)境當(dāng)中，僅部分種對人及動物致病，導(dǎo)致腦膜炎、菌血癥和孕婦早產(chǎn)等。在李斯特氏菌屬中，單增李斯特氏菌(L. Monocytogenes)是一種重要的病原菌，宿主主要是人和動物。人感染李斯特氏菌99%是食用了單增李斯特菌污染的食品，尤其是即食類的食品。在美國每年大約有2500人患李斯特氏菌病，病死率高達(dá)20%-30%。因此，李斯特氏菌的分離和鑒定仍然是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。
從食品或者臨床樣本分離的李斯特氏菌的鑒定方法主要有API(Analytic Products INC)鑒定系統(tǒng)、羅氏公司的Micro-ID、Biolog和HK-MID-Listeria鑒定系統(tǒng)等。
廣東環(huán)凱微生物科技有限公司利用101株野生分離株對新型HK-MID-Lister鑒定系統(tǒng)、傳統(tǒng)方法、API-Listeria方法進(jìn)行了評估，鑒定結(jié)果見表1。
表1 三種方法鑒定結(jié)果的符合率
Table1 The coincidence rate of the three methods
|
Listeria sp. |
HK-MID(株) |
API (株) |
傳統(tǒng)方法 (株) |
符合率(%) |
|
|
|
HK-MID和傳統(tǒng)方法 |
API和傳統(tǒng)方法 |
HK-MID和API |
||||
|
單增生李斯特氏菌 L. monocytogenes |
69 |
67 |
69 |
100 |
97.1 |
97.1 |
|
英諾克李斯特氏菌 L. innocua |
25 |
24 |
25 |
100 |
96.0 |
96.0 |
|
西爾李斯特氏菌 L. seeligeri |
2 |
0 |
2 |
100 |
0.0 |
0.0 |
|
威爾斯李斯特氏菌 L. welshimeri |
3 |
2 |
3 |
100 |
66.7 |
66.7 |
|
格式李斯特氏菌 L. grayi |
2 |
1 |
2 |
100 |
50.0 |
50.0 |
|
合計 |
101 |
94 |
101 |
100 |
93.1 |
93.1 |
從表1中可以得出，與傳統(tǒng)方法對李斯特氏菌屬的鑒定結(jié)果相比較， HK-MID-Listeria和API-Listeria分別達(dá)到了100%和93.1%。API-Listeria鑒定比傳統(tǒng)方法的鑒定率稍微偏低，具體是API- Listeria對2株單增李斯特氏菌、1株英諾克李斯特氏菌、2株西爾李斯特氏菌、1株威爾李斯特氏菌和1株格式李斯特氏菌不能給出鑒定結(jié)果；而傳統(tǒng)方法和HK-MID-Listeria對李斯特氏菌的鑒定完全相符。HK-MID-Listeria和API-Listeria鑒定方法之間差異主要是與兩種鑒定方法的原理不同引起的。
1、在溶血反應(yīng)方面
HK-MID- Listeria鑒定系統(tǒng)在鑒定條上，第12孔為空白孔，添加血紅素到加有100微升菌懸液的第12 個空的孔中培養(yǎng)，通過是否產(chǎn)生沉淀分層即可判斷陰陽性，管底有沉淀結(jié)果為陰性即不溶血，反之為陽性即溶血（見圖1），因此HK-MID- Listeria的鑒定實(shí)驗(yàn)不需要做溶血的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。
API-Listeria “DIM”的反應(yīng)結(jié)果通過顏色變化來判讀，陽性反應(yīng)為橙色, 陰性反應(yīng)為淡粉色或淺橙色, 由于各種因素的影響，如：添加試劑不穩(wěn)定等因素，常常會造成反應(yīng)結(jié)為中間色，結(jié)果判讀比較困難，容易導(dǎo)致誤判。API-Listeria鑒定系統(tǒng)的“DIM”的反應(yīng)并不能完全替代溶血反應(yīng)，需要補(bǔ)充溶血性試驗(yàn)。
2、HK-MID- Listeria使用操作更方便，結(jié)果更快、更可靠
API- Listeria 加樣過程中要特別注意不能產(chǎn)生氣泡；而HK-MID- Listeria對菌懸液的濃度沒有嚴(yán)格的要求，加樣更直接（見圖1）。HK-MID- Listeria鑒定條上面覆蓋有封口薄膜，可以防止在培養(yǎng)過程中液體過度蒸發(fā)；API- Listeria需要額外維持濕度的濕室。
![\"](\"/UploadFiles/main/Images/2014/12/20141209111345.jpg\")
圖1 HK-MID- Listeria鑒定系統(tǒng)
API- Listeria鑒定的可疑菌落要求在非選擇性平板上生長的純培養(yǎng)物；而HK-MID- Listeria可以從選擇性平板或者顯色培養(yǎng)基平板上挑取單菌落進(jìn)行鑒定，可以提前24h得到鑒定結(jié)果。
HK-MID- Listeria鑒定條已通過了國際AOAC 的認(rèn)證。其鑒定系統(tǒng)中含有的12種生化反應(yīng)中，有3種特征性反應(yīng)：七葉苷、阿拉伯糖和海藻糖，這3種生化反應(yīng)中任意一種為陰性即可判定鑒定的菌株為非李斯特菌屬，這3種生化反應(yīng)可以提高HK-MID- Listeria 鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、在數(shù)據(jù)庫方面
API- Listeria鑒定系統(tǒng)對幾個菌株不能鑒定其模式菌與其數(shù)據(jù)庫有很大的關(guān)系。API- Listeria鑒定系統(tǒng)的數(shù)據(jù)庫主要是根據(jù)常見李斯特氏菌和臨床分離樣本建立的數(shù)據(jù)庫，致使從食品中分離的部分菌株的生化反應(yīng)模式不包含在API-Listeria的數(shù)據(jù)庫中。
HK-MID- Listeria鑒定系統(tǒng)模式菌數(shù)據(jù)庫是基于從食品、藥品和臨床診斷等分離的菌株的鑒定來建立的。因此，HK-MID- Listeria鑒定系統(tǒng)更適合應(yīng)用從食品、藥品中分離的李斯特氏菌的鑒定。相對于API- Listeria鑒定系統(tǒng)來說，HK-MID- Listeria鑒定系統(tǒng)的數(shù)據(jù)庫中缺乏環(huán)境如土壤等中李斯特氏菌的數(shù)據(jù)。
總之，HK-MID- Listeria鑒定系統(tǒng)加樣方便，每孔滴加100微升左右；可以直接從選擇性培養(yǎng)基挑取菌落；不需要補(bǔ)充血平板實(shí)驗(yàn)；通過AOAC認(rèn)證，結(jié)果更可靠；整個鑒定過程節(jié)約48h。
參考文獻(xiàn)：田亮，盧勉飛，林干等，《新型HK-MID-Listeria 生化鑒定系統(tǒng)的鑒定效果評估》，食品研究與開發(fā)，2014,35（329）：86-88。
